Îïðå äå ëå íèå óðîâ íÿ ñïîí òàí íî ãî è èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà êëåòîê, ïîëó åííûõ èç îïåðàöèîííîãî ìàòåðèàëà ïðè ëèôòèíãå ëèöà

Transcription

1 ÊËÈÍÈ ÅÑÊÈÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß Ïà òî ãå íåç Ò.14, ¹4. Ñ ÓÄÊ: Îïðå äå ëå íèå óðîâ íÿ ñïîí òàí íî ãî è èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà êëåòîê, ïîëó åííûõ èç îïåðàöèîííîãî ìàòåðèàëà ïðè ëèôòèíãå ëèöà Àá ðà ìÿí Ø.Ì., Ìî ðî çîâ Ñ.Ã. ÔÃÁÍÓ «Íàó íî-èññëåäîâàòåëüñêèé èíñòèòóò îáùåé ïàòîëîãèè è ïàòîôèçèîëîãèè», Ìîñêâà, , óë. Áàëòèéñêàÿ, 8 Â îñíî âå ïà òî ãå íå çà íå êðî çà ìÿã êèõ òêà íåé ïî ñëå ïðî âå äå íèÿ ïëà ñ òè å ñêèõ îïå ðà öèé íà ëè öå ëåæèò íàðóøåíèå âàñêóëÿðèçàöèè êîæè è ïîäêîæíîé êëåò àòêè, ñíèæåíèå ýíåðãåòè åñêîãî ïîòåíöèàëà êëåòîê è àêòèâàöèÿ â íèõ ñèãíàëüíûõ ïóòåé àïîïòîçà. Öåëüþ äàí íîé ðà áî òû áû ëî èç ìå ðå íèå óðîâ íÿ ñïîí òàí íî ãî è èíäóöèðîâàííîãî Ñ2-öåðàìèäîì àïîïòîçà â êëåòêàõ, âûäåëåííûõ èç îïåðàöèîííîãî ìàòåðèàëà 52 ïàöèåí - òîê (âîç ðàñò îò 32 äî 64 ëåò), îïå ðè ðî âàí íûõ ïî ïî âî äó ëèô òèí ãà ëè öà. Ìåòîäû. Cóñïåíçèþ êëåòîê ïîëó àëè ïóòåì îáðàáîòêè êîëëàãåíàçîé îáðàçöîâ ïîäêîæíî-æèðîâîé òêàíè ëèöà, èññå åííûõ âî âðåìÿ îïåðàöèè. Ïðîöåíò ñïîíòàííîãî àïîïòîçà îïðåäåëÿëè ïî îêðàñêå ïðîïèäèóìîì èîäèäîì íà ïðîòî íîì öèòîìåò - ðå. Ïðîöåíò èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà èçìåðÿëè ïîñëå êóëüòèâèðîâàíèè êëåòîê ñ Ñ2-öåðàìèäîì. Èçìå - íåíèå ìåìáðàííîãî ïîòåíöèàëà ìèòîõîíäðèé îïðåäåëÿëè ïî îêðàñêå JC-1 ìåòîäîì ïðîòî íîé öèòîìåò - ðèè. Ðåçóëüòàòû. Óðî âåíü ñïîí òàí íî ãî àïîï òî çà âî âñåõ ïî ïó ëÿ öè ÿõ âû äå ëåí íûõ êëå òîê íå ïðå âû øàë íîð - ìàëüíûõ çíà åíèé. Ïîñëå îáðàáîòêè Ñ2-öåðàìèäîì îáðàçöû ìîæíî áûëî óñëîâíî ðàçäåëèòü íà äâå ãðóï - ïû ñ íèç êèì è âû ñî êèì óðîâ íåì èí äó öè ðî âàí íî ãî àïîï òî çà (18 ± 4% è 37 ± 5% äëÿ ýïè òå ëè à ëü íûõ êëå òîê è 18 ± 5% è 31 ± 4% äëÿ àäèïîöèòîâ). Íàèáîëüøèé ïðîöåíò èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà ðåãèñòðèðîâàëñÿ ó ïàöèåíòîê ñòàðøå 50 ëåò. Äèíàìè åñêîå íàáëþäåíèå â òå åíèå 30 äíåé ïîñëå îïåðàöèè âûÿâèëî èíôè - öèðîâàíèå îïåðàöèîííîãî øâà ó òðåõ áîëüíûõ (1,5%), óäëèíåíèå ñðîêîâ çàæèâëåíèÿ îïåðàöèîííîé ðàíû ó 11 áîëüíûõ (5,7%) è â äâóõ ñëó àÿõ àñòè íûé íåêðîç ðóáöà, òî ïîòðåáîâàëî ïðîâåäåíèÿ äîïîëíèòåëü - íîé îïåðàöèè. Ó ýòèõ áîëüíûõ ðåòðîñïåêòèâíî âûÿâëåí ïîâûøåííûé ïðîöåíò èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà. Âûâîäû. Ïîâûøåíèå óðîâíÿ öåðàìèä-èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà â êëåòêàõ, âûäåëåííûõ èç îïåðàöèîííîãî ìàòåðèàëà, óêàçûâàåò íà âûñîêèé ðèñê ðàçâèòèÿ ïîñëåîïåðàöèîííûõ îñëîæíåíèé â îáëàñòè ðóáöà, ñâÿçàí - íûõ ñ íå êðî çîì ìÿã êèõ òêà íåé. Êëþ åâûå ñëîâà: ïîäòÿæêà ëèöà, âûäåëåíèå êëåòîê êîæè, àïîïòîç, ìèòîõîíäðèè. Äëÿ öèòèðîâàíèÿ: Àáðàìÿí Ø.Ì., Ìîðîçîâ Ñ.Ã. Îïðåäåëåíèå óðîâíÿ ñïîíòàííîãî è èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà êëåòîê, ïîëó åííûõ èõ îïåðàöèîííîãî ìàòåðèàëà ïðè ëèôòèíãå ëèöà. Ïàòîãåíåç. 2016; 14(4): Äëÿ êîððåñïîíäåíöèè: Ìîðîçîâ Ñåðãåé Ãåîðãèåâè, äîêò. ìåä. íà óê, ïðî ôåñ ñîð, ëåí-êîðð. ÐÀÍ, äè - ðåêòîð Ôåäåðàëüíîãî ãîñóäàðñòâåííîãî áþäæåòíîãî íàó íîãî ó ðåæäåíèÿ «Íàó íî-èññëåäîâàòåëüñêèé èíñòèòóò îáùåé ïàòîëîãèè è ïàòîôèçèîëîãèè», biopharm@list.ru. Ôè íàí ñè ðî âà íèå. Èñ ñëå äî âà íèå íå èìå ëî ñïîí ñîð ñêîé ïîä äåð æ êè. Êîíôëèêò èíòåðåñîâ. Àâòîðû çàÿâëÿþò îá îòñóòñòâèè êîíôëèêòà èíòåðåñîâ. Ïîñòóïèëà Spon ta ne ous and in duced apoptosis of cells obtained from surgical materials after face lift Abramian Sh.M., Morozov S.G. The in sti tute of Gen eral Pa thol ogy and Pathophysiology, 8 Baltiyskaya St., Mos cow, Rus sian Fed er a tion Sub cu ta ne ous ne cro sis af ter face lift is con nected with im paired skin and sub cu ta ne ous tis sue vascularization as well as with skin cell en ergy de fi ciency and ac ti va tion of the apoptotic sig nal ing path ways. AIM of this work was to mea sure the level of spon ta ne ous and C2-ceramide-induced apoptosis in cells iso lated from sur gi cal ma te ri als. Patients. The face sub cu ta ne ous tis sues sam ples have been ob tained from 52 pa tients (women, years old) dur ing plas tic sur gery for a face lift. Methods. Cell sus pen sions from sur gi cal sam ples were pre pared by treat - ment with col la gen ase fol lowed by centrifugation and in cu ba tion in com plete me dium RPMI 1640 with 10% FCS for 2h at +37 C, 5% CO 2. Spon ta ne ous apoptosis level was cal cu lated in main cell pop u la tions by stain ing with propidium io dide and flow cytometry. The per cent age of in duced apoptosis was mea sured af ter the cul tur ing of cells with C2-ceramide. Mi to chon drial mem brane po ten tial was de ter mined by JC-1 stain ing and flow cytometry. Results. The spon ta ne ous apoptosis lev els in all in ves ti gated cell pop u la tions did not ex ceed the nor mal val ues. C2-ceramide treat ment re vealed two groups sam ples with high and low lev els of in duced apoptosis (18 ± 4% and 37 ± 5% for ep i the lial cells, and 18 ± 5% and 31 ± 4% for adipocytes). The high est per cent age of in duced apoptosis was ob served for pa tients over 50 years. The mon i tor ing of pa tients within 30 days af ter sur gery re - vealed a pro longed pe riod for wound heal ing (5.7%), scar in fec tions (1.5%), and scar par tial ne cro sis fol lowed by re peated sur gery (1%). In di vid ual case his tory anal y sis iden ti fied the higher per cent age of in duced apoptosis and ISSN

2 lower mi to chon drial mem brane po ten tial in these pa tients. Conclusions. The ex ces sive level of ceramide-induced apoptosis in cells iso lated from sur gi cal ma te rial has been found to elu ci date the high risk of post op er a tive com - pli ca tions as so ci ated with scar ne cro sis. Key words: face lift, skin cell iso la tion, apoptosis, mi to chon dria. For citation: Abramian Sh.M., Morozov S.G. Spon ta ne ous and in duced apoptosis of cells ob tained from sur gi - cal ma te ri als af ter face lift. Patogenez. 2016; 14(4): (In Rus sian). For correspondence: Morozov Sergey G., MD, pro fes sor, cor re spond ing mem ber. Rus sian Acad emy of Sci - ences, Di rec tor Fed eral State Bud get ary Sci en tific In sti tute «Sci en tific in sti tute of Gen eral Pa thol ogy and Pathophysiology», 8 Baltiyskaya St., Mos cow, Rus sian Fed er a tion, biopharm@list.ru. Funding. The study had no spon sor ship. Conflict of interest. The au thors de clare no con flict of in ter est. Received Ââåäåíèå Ëè öî ýòî íàè áî ëåå âàæ íàÿ àñòü òå ëà å ëî âå êà ñ òî - êè çðåíèÿ åãî ýñòåòè åñêîãî âîñïðèÿòèÿ. Ïðîâåäåíèå ïëà - ñòè åñêèõ îïåðàöèé íà ëèöå òðåáóåò þâåëèðíîé òî íîñòè èñïîëíåíèÿ è ïîëíîãî âîññòàíîâëåíèÿ êîæíîãî ïîêðîâà ïîñëå îïåðàöèè. Â ðåçóëüòàòå òðåáóåòñÿ ïîëó èòü ãëàäêèé êîíòóð ëèöà, õîðîøåå ñîñòîÿíèå êîæè ñ íîðìàëüíîé âàñêóëÿðèçàöèåé è ôóíêöèîíàëüíîé àêòèâíîñòüþ âñåõ ìèìè - åñêèõ ìûøö, à òàêæå ïðåäîòâðàòèòü îáðàçîâàíèå âèäèìûõ ïîñëåîïåðàöèîííûõ ðóáöîâ. Îäíàêî ïðàêòè åñêè ïðè ëþáîì îïåðàòèâíîì âìåøàòåëüñòâå èìååò ìåñòî êðàòêî - âðåìåííîå ïðåêðàùåíèå öèðêóëÿöèè êðîâè â îïåðèðóåìîì ó àñòêå òêàíåé. Ïðè íàðóøåíèè âàñêóëÿðèçàöèè òêàíåé â ïîñëåîïåðàöèîííîì ïåðèîäå ìîæåò áûòü íåêðîç êîæè [1]. Íåáîëüøèå çîíû íåêðîçà ðåãèñòðèðóþòñÿ ïðàêòè åñêè âî âñåõ ïîñëåîïåðàöèîííûõ ðóáöàõ, òî âûÿâëÿåòñÿ ìåòîäîì öèôðîâîãî ôîòîàíàëèçà [2]. Â êåëîèäíûõ ðóáöàõ àñòî èìåþòñÿ âûðàæåííûå çîíû íåêðîçà [3]. Ïëàñòè åñêàÿ îïåðàöèÿ ïî âîññòàíîâëåíèþ êîíòóðà ëèöà (ëèôòèíã ëèöà, èëè ïîäòÿæêà) ìîæåò äàâàòü ïîñëåîïåðàöèîííûå îñëîæíåíèÿ, âêëþ àÿ àñòè íûé íåêðîç ìÿãêèõ òêàíåé â îáëàñòè øâà. åì áîëüøå îáëàñòü îïåðàöèè, òåì âûøå âåðîÿòíîñòü ðàçâèòèÿ íåêðîçà [4]. Âûñîêèé ïðîöåíò íåêðîçà íàáëþäàåòñÿ ïðè ïëàñòèêå íàðóæíîãî óõà [5]. Ïåðåñàäêà ñêàëüïà èëè åãî àñòåé ñîïðîâîæäàåòñÿ ìíîæåñòâåííûìè íåêðîçàìè â ñâÿçè ñ íåäîñòàòî íûì óðîâíåì âàñêóëÿðèçàöèè [6]. Ïîñëå êðàíèîôàöèàëüíîé ïëàñòèêè àñòè íûé ôàöèàëüíûé íåêðîç íàáëþäàåòñÿ â 5,7% ñëó àåâ, òîòàëüíûé íå êðîç â 2,9%, ïðè åì ó æåí ùèí âå ðî ÿò íîñòü íå êðî çà çíà èòåëüíî âûøå, åì ó ìóæ èí âñëåäñòâèå õóäøåãî ïðèæèâëåíèÿ êîæíîãî ëîñêóòà [7]. Èñïîëüçîâàíèå ñêëåðîçèðóþùåé òåðàïèè ïðè ñîñóäèñòûõ äåôåêòàõ ëèöà ìîæåò ïðèâåñòè ê íåêðîçó ìÿãêèõ òêàíåé, îñîáåííî ïðè ïðèìåíåíèè àáñîëþòíîãî ýòàíîëà [8]. Íåêðîç ìîæåò ðàçâèòüñÿ âñëåäñòâèå ýìáîëèçàöèè ñîñóäîâ è ýêñòðàñîñóäèñòîé êîìïðåññèè ïîñëå ââåäåíèÿ ïðåïàðàòîâ ñ ãèàëóðîíîâîé êèñëîòîé. Åñëè ïàöèåíò ïîëó àë òàêèå èíúåêöèè äî îïåðàöèè ïî ëèôòèíãó ëèöà, òî âîçðàñòàåò ðèñê ðàçâèòèÿ ïîñëåîïåðàöèîííûõ îñëîæíåíèé. Äëÿ ïðåäîòâðàùåíèÿ íåêðîçà êîæè íåîáõîäèìî ðàñïîçíàâàòü èøåìèþ íà ðàííèõ ñòàäèÿõ å ðàçâèòèÿ è âîññòàíàâëèâàòü êðîâîñíàá - æåíèå òêàíåé [9]. Ó ïàöèåíòîâ, ïðèíèìàâøèõ èçîòðåòèíîèí äëÿ ëå åíèÿ àêíå ïåðåä ïëàñòè åñêîé îïåðàöèåé, ìîæåò áûòü íå êðîç ìûøö ëè öà [10]. Ñëó àè íå êðî çà ìÿã êèõ òêà íåé ëèöà îïèñàíû ïðè èíúåêöèè êîëëàãåíà [11]. Èøåìèÿ, âîñïàëåíèå, ïîâûøåíèå óðîâíÿ ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ è àóòîôàãèÿ èãðàþò ðîëü â ðàçâèòèè íåêðîçà òêàíåé ïîñëå îïåðàöèè [12]. Ïîñëå ïðîäîëæèòåëüíîé èøåìèè ìèòîõîíäðèè êëåòîê êîæè ïîäâåðæåíû äåãåíåðàöèè. Íåêðîç ìûøå íûõ êëåòîê ñîïðîâîæäàåòñÿ äèôôóçíûì âîñïàëèòåëüíûì èíôèëüòðàòîì, ïîâðåæäåíèåì ìåëêèõ ñîñóäîâ, òî íàáëþäàåòñÿ åðåç 30 àñîâ ïîñëå îïåðàöèè [13]. Ïîäêîæíûé èíêàïñóëèðîâàííûé íåêðîç îáû íî ðàçâèâàåòñÿ áåññèìïòîìíî è ìîæåò äèàãíîñòèðîâàòüñÿ òîëüêî ñ ïîìîùüþ ÓÇÈ èëè äðóãèõ èíñòðóìåíòàëüíûõ ìåòîäîâ èññëåäîâàíèÿ [14]. Â íàñòîÿùåå âðåìÿ õèðóðãè àêòèâíî èùóò ñïîñîáû ïðåäîòâðàùåíèÿ ïîâðåæäåíèÿ òêàíåé ïîñëå èøåìèè. Ýòè ìå ðî ïðè ÿ òèÿ íà ïðàâ ëå íû íà âîñ ñòà íîâ ëå íèå êðî âî òî êà, ïîääåðæàíèÿ âûñîêîãî óðîâíÿ îêñèãåíàöèè êîæè, ñâÿçû - âà íèÿ è óäà ëå íèÿ ñâî áîä íûõ ðà äè êà ëîâ, îêà çû âà þ ùèõ ïî âðåæ äà þ ùåå äåé ñò âèå íà êëåò êè. Àíàëèç ñîñòîÿíèÿ æèçíåñïîñîáíîñòè êëåòîê, à òàêæå ïðîãðàììèðîâàííîé ãèáåëè êëåòîê (àïîïòîçà), ìîæåò äàòü èíôîðìàöèþ î ðèñêå ðàçâèòèÿ ïîñëåîïåðàöèîííûõ îñëîæíåíèé. Íàèáîëåå èíòåðåñíîé ñ ýòîé òî êè çðåíèÿ ìåòîäèêîé ÿâëÿåòñÿ îïðåäåëåíèå èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà, êîãäà êëåòêà êîíòàêòèðóåò ñ âåùåñòâîì, ñâÿçûâàþùèì ðåöåïòîðû àïîïòîçà èëè âûçûâàþùèì èçìåíåíèå ìèòîõîíäðèé. Åñëè â êëåòêå óæå àêòèâèðîâàíû ñèãíàëüíûå ïóòè àïîïòîçà, òî äîïîëíèòåëüíûé òðèããåð âûçîâåò íåîáðàòèìóþ ãèáåëü êëåòîê. Òàê ìîæíî âûÿâèòü òå êëåòêè, êîòîðûå íåèçáåæíî ïîãèáíóò âî âðåìÿ îïåðàöèè âñëåäñòâèå èøåìèè. Öå ëüþ äàí íîé ðà áî òû áû ëî îïðå äå ëå íèå óðîâ íÿ ñïîí - òàí íî ãî è èí äó öè ðî âàí íî ãî àïîï òî çà êëå òîê â òêà íÿõ, âûäåëåííûõ èç îáëàñòè îïåðàöèîííîãî ïîëÿ ïðè êîððåê - öèè ëè öà, à òàê æå èçó å íèå ìè òî õîí ä ðè à ëü íî ãî ïî òåí öè - à ëà êëå òîê ïî âêëþ å íèþ êðà ñè òå ëÿ JC-1. Ìàòåðèàëû è ìåòîäû Ïàöèåíòû Â äàííîì èññëåäîâàíèè èñïîëüçîâàí îïåðàöèîííûé ìàòåðèàë, ïîëó åííûé ïðè ïðîâåäåíèè ïîäòÿæêè ëèöà ó æåí ùèí â âîç ðà ñ òå îò 32 äî 64 ëåò (n = 52) â Êëè íè êå ïëàñòè åñêîé è ýñòåòè åñêîé õèðóðãèè «Ôðàóêëèíèê», Ìîñêâà. Âñå ïàöèåíòû ïîäïèñûâàëè èíôîðìèðîâàííîå ñîãëàñèå íà ó àñòèå â èññëåäîâàíèè è ðàçðåøåíèå íà àíî - íèìíîå èñïîëüçîâàíèå èõ áèîëîãè åñêîãî ìàòåðèàëà, óòâåðæäåííîå Ó åíûì Ñîâåòîì ÔÃÁÍÓ «Íàó íî-èññëåäîâàòåëüñêèé èíñòèòóò îáùåé ïàòîëîãèè è ïàòîôèçèîëîãèè». Ïðîòîêîë äàííîãî èññëåäîâàíèÿ áûë îäîáðåí Ýòè åñêîé Êîìèññèåé èíñòèòóòà. Äàííîå èññëåäîâàíèå âûïîëíåíî ñòðîãî â ðàìêàõ Õåëüñèíñêîé Äåêëàðàöèè ïî ñîáëþäåíèþ ïðàâ åëîâåêà. Ïðîâåäåííûå îïåðàòèâíûå âìåøàòåëüñòâà âûïîëíÿëèñü ïëàíîâî ïî óòâåðæäåííîìó ïðîòîêîëó. Êðèòåðèÿìè èñêëþ åíèÿ ïàöèåíòîâ èç èññëåäîâàíèÿ áûëî íàëè èå îñòðûõ âèðóñíûõ èëè áàêòåðèàëüíûõ èíôåêöèé, ñàõàðíîãî äèàáåòà, ñèñòåìíûõ àëëåðãè åñêèõ èëè âîñ ïà ëè òå ëü íûõ çà áî ëå âà íèé, áå ðå ìåí íî ñòè, îí êî ëî ãè å - ñêî ãî çà áî ëå âà íèÿ. 64 ÏÀÒÎÃÅÍÅÇ Ò. 14, ¹4

3 Âñåì ïàöèåíòàì ïðîâîäèëè ñòàíäàðòíûå ëàáîðàòîðíûå èññëåäîâàíèÿ, âêëþ àÿ îáùèé àíàëèç êðîâè è ìî è, áèîõèìè åñêèé àíàëèç êðîâè, à òàêæå èíñòðóìåíòàëüíûå ìåòîäû èññëåäîâàíèÿ, íåîáõîäèìûå äëÿ ïðîâåäåíèÿ îïåðàöèè. Ðà áî òà ñ êðî âüþ ïà öè åí òîâ Ðàáîòà ñ êðîâüþ ëþäåé ïðîâîäèëàñü ïî ìåæäóíàðîäíûì ïðàâèëàì ðàáîòû ñ áèîëîãè åñêèì ìàòåðèàëîì. Êðîâü áðà - ëè íà òî ùàê óò ðîì â äåíü îïå ðà öèè èç ëîê òå âîé âå íû â ïðî - áèðêó ñ ÝÄÒÀ. Ôîðìóëó êðîâè îïðåäåëÿëè íà ãåìàòîëîãè- åñêîì àíàëèçàòîðå Pentra Nexus HORIBA (Horiba ABX SAS, Ôðàíöèÿ). Áèîõèìè åñêèå èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäèëè íà àíàëèçàòîðå Fuji Dri-Chem4000 (Fujifilm, ßïîíèÿ). Âû äå ëå íèå êëå òîê èç îïå ðà öè îí íî ãî ìà òå ðè à ëà Êóñî êè òêàíè ðàçìåðîì 2 õ 1 õ 0,5 ñì, èñ ñå åí íûå èç ïîäêîæíî-æèðîâîé êëåò àòêè â îáëàñòè îïåðàöèîííîãî ïîëÿ, ïðîìûâàëè â ôèçèîëîãè åñêîì ðàñòâîðå, ïîìåùàëè â ïðî áèð êó ñ ïîë íîé ñðå äîé RPMI 1640 (Sig ma) ñ 10% ýì á - ðèîíàëüíîé òåëÿ üåé ñûâîðîòêè (ÝÒÑ, Flow) è îñòàâëÿëè â õîëîäèëüíèêå ïðè +4 Ñ äî îêîí àíèÿ îïåðàöèè. Çàòåì òêàíè ïåðåíîñèëè â ñòåðèëüíûå àøêè Ïåòðè ñî ñâåæåé ñðåäîé RPMI 1640 ñ 10% ÝÒÑ, ñåïàðèðîâàëè òîíêèìè íîæíèöàìè íà ìàêñèìàëüíî ìåëêèå ôðàãìåíòû, ïîëó åííóþ âçâåñü îñàæ äà ëè ïðè 1000 îá./ìèí â òå å íèå 3 ìè íóò, ñó ïåð - íàòàíò ñëèâàëè, ê îñàäêó äîáàâëÿëè 0,05% òðèïñèí íà ðàñòâîðå Õåíêñà áåç ôåíîëà (ÏàíÝêî, Ìîñêâà). åðåç 5 ìèíóò ñóñïåíçèþ öåíòðèôóãèðîâàëè, ñóïåðíàòàíò óäàëÿëè, ê îñàäêó äîáàâëÿëè êîëëàãåíàçó (Sigma) â ïîëíîé ñðåäå RPMI 1640 ñ 5% ÝÒÑ, êëåòêè ïåðåíîñèëè âî ôëàêîíû Êàððåëÿ è èíêóáèðîâàëè 60 ìèíóò ïðè t +37 Ñ ïðè ïîñòîÿííîì ìåäëåííîì ïåðåìåøèâàíèè. Çàòåì êëåòêè äâàæäû îòìûâàëè öåíòðèôóãèðîâàíèåì, ïåðåâîäèëè â ïîëíóþ ñðåäó RPMI 1640 ñ 15% ÝÒÑ è êó ëü òè âè ðî âà ëè â òå å íèå 2 à ñîâ ïðè t +37 Ñ è 5% ÑÎ 2 äëÿ âîññòàíîâëåíèÿ ðåöåïòîðíîãî àïïàðàòà êëåòîê. Ïîñëå ýòîãî ñóñïåíçèþ êëåòîê, íå âçáàëòûâàÿ, ïðîïóñêàëè åðåç âîðîíêó ñ õëîïêîâîé âàòîé äëÿ îñàæäåíèÿ êîíãëîìåðàòîâ ïîãèáøèõ êëåòîê. Æèçíåñïîñîáíîñòü êëåòîê ïðè îêðàñêå òðèïàíîâûì ñèíèì ñîñòàâëÿëà 92 ± 3%. Äëÿ àíàëèçà ïîïóëÿöèé êëåòîê, âûäåëåííûõ èç îïåðàöèîííîãî ìàòåðèàëà, ñóñïåíçèè êëåòîê îêðàøèâàëè ìîíîêëîíàëüíûìè àíòèòåëàìè (mab) ê ðåöåïòîðàì îíêîñòàòèíà Ì (anti-ostì, ab156939) íà àäèïîöèòàõ [15], ðåöåïòîðàì ýôðèíà (anti-eph-r, ab5497) íà ýïèòåëèàëüíûõ êëåòêàõ [16], ðåöåïòîðàì íåéòðîôèëîâ (anti-cd66b, ab48589) è ëèìôîöèòîâ (an ti-cd3, ab106215) (âñå mab îò Ab cam). Èñ ñëå äî âà íèå ñïîí òàí íî ãî è èí äó öè ðî âàí íî ãî àïîï òî çà êëå òîê Äëÿ îïðåäåëåíèÿ óðîâíÿ ñïîíòàííîãî àïîïòîçà êëåòêè ïîäêîæíî-æèðîâîé òêàíè, âûäåëåííûå èç îïåðàöèîííîãî ìàòåðèàëà (ñì. âûøå), ïîäñ èòûâàëè, äîâîäèëè äî êîíöåíòðàöèè 10 õ 10 6 /ìë â 4% ïàðàôîðìàëüäåãèäå, îòìûâàëè öåíòðèôóãèðîâàíèåì è îêðàøèâàëè ïðîïèäèóìîì èîäèäîì (PI, Sigma) â ãèïîòîíè åñêîì áóôåðå (íà Í 2 Î dest) ñ 0,1% öèò - ðà òîì íà òðèÿ è 0,01% Òðè òî íîì Õ100 (Sig ma). Äëÿ îïðå äå ëå íèÿ óðîâ íÿ èí äó öè ðî âàí íî ãî àïîï òî çà êëå òè, âû äå ëåí íûå èç ïîä êîæ íî-æè ðî âîé êëåò àò êè, äî - âîäèëè äî êîíöåíòðàöèè 10 õ 10 6 íà 1 ìë ïîë íîé ñðå äû RPMI 1640 ñ 5% ÝÒÑ è èí êó áè ðî âà ëè 2,5 à ñà ïðè t +37 Ñ è 5% ÑÎ 2 â ïðèñóòñòâèè 20 ìèêðîì êëåòî íî-ïðîíèêàþ - ùå ãî Ñ2-öå ðà ìè äà (Avan ti Li pids Co., USA) äëÿ àêòèâèðî - âà íèÿ ñèã íà ëü íûõ ïó òåé àïîï òî çà. Çà òåì êëåò êè îò ìû âà - ëè, ôèêñèðîâàëè 4% ïàðàôîðìàëüäåãèäîì è îêðàøèâàëè PI â ãèïîòîíè åñêîì áóôåðå (ñì. âûøå) [17]. Îïðå äå ëå íèå ìåì á ðàí íî ãî ïî òåí öè à ëà ìè òî õîí ä ðèé Æè âûå êëåò êè, âû äå ëåí íûå èç ïîä êîæ íî-æè ðî âîé êëåò àò êè, îêðà øè âà ëè êðà ñè òå ëåì JC-1 äëÿ îïðå äå ëå íèÿ ìåìáðàííîãî ïîòåíöèàëà ìèòîõîíäðèé. Îêðàñêó ïðîâîäèëè ñ ïîìîùüþ êîììåð åñêîãî íàáîðà Becton Dickinson ïî ïðèëàãàåìîé èíñòðóêöèè [18]. Àíà ëèç êëå òîê íà ïðî òî íîì öè òî ìåò ðå Êëåòêè àíàëèçèðîâàëè íà ïðîòî íîì öèòîìåòðå FACS- Calibur (Becton Dickinson, USA) ïî ïðîãðàììå SimulSet. Ïåðâè íûé àíàëèç êëåòîê ïðîâîäèëè ïðè ïðÿìîì è áîêî - âîì ïðîñâå èâàíèè ëàçåðîì â ñèñòåìå êîîðäèíàò íà êàíàëàõ FSC/SSC (For ward Sca te Cells / Si de Sca te Cells). Çà òåì âû äå - ëÿëè íåîáõîäèìûé ãåéò (îáëàñòü) êëåòîê, â êîòîðîì ïðîâîäèëè àíàëèç èíòåíñèâíîñòè ôëóîðåñöåíöèè íà ñîîòâåòñòâóþùèõ êàíàëàõ â çàâèñèìîñòè îò èñïîëüçîâàííîãî êðàñèòå - ëÿ.  êàæäîì îáðàçöå àíàëèçèðîâàëîñü 10 òûñÿ ñîáûòèé. Èíòåíñèâíîñòü ôëóîðåñöåíöèè PI îïðåäåëÿëè íà êàíàëå FL2-À. Èíòåíñèâíîñòü ôëóîðåñöåíöèè êðàñèòåëÿ JC-1 îïðåäåëÿëè â ñèñòåìå êîîðäèíàò FL1/FL2, òàê êàê íåîáõîäèìî ðåãèñòðèðîâàòü ïåðåìåùåíèå ãåéòà êëåòîê èç êðàñíîé çîíû â çåëåíóþ ïðè ïàäåíèè ìåìáðàííîãî ïîòåíöèàëà.  êà åñòâå íåãàòèâíîãî êîíòðîëÿ ðåãèñòðèðîâàëàñü ôëóîðåñöåíöèÿ êëåòîê áåç äîáàâëåíèÿ êðàñèòåëåé. Ñòàòèñòè åñêèé àíàëèç Ïîëó åííûå àâòîðàìè äàííûå áûëè ñòàòèñòè åñêè îáðàáîòàíû ïî ïðîãðàììå ANOVA. Ñðàâíåíèå ìåæäó äâóìÿ ãðóïïàìè ïðîâîäèëè ïî t-êðèòåðèþ Ñòüþäåíòà, äàííûå ïðåäñòàâ ëå íû êàê Ì ± m. Äëÿ ãðóïï äàí íûõ ñ ìà ëîé âû áîð êîé ïðèìåíÿëñÿ íåïàðàìåòðè åñêèé ìåòîä ìíîæåñòâåííîãî ñðàâíåíèÿ ïî êðèòåðèþ Íüþìåíà Êåéëñà, ãäå ð < 0,05 äà åò - ñÿ êàê ñòàòèñòè åñêè çíà èìîå ðàçëè èå ìåæäó ãðóïïàìè. Ðåçóëüòàòû è îáñóæäåíèå Õà ðàê òå ðè ñòè êà áî ëü íûõ  äàííîì èññëåäîâàíèè ïðèíèìàëè ó àñòèå æåíùèíû îò 32 äî 64 ëåò.  ñâÿ çè ñ òåì, òî ñî ñòî ÿ íèå êî æè è ïîä êîæ - íî-æèðîâîé êëåò àòêè ñòðîãî çàâèñèò îò âîçðàñòà [19], ìû ðàçäåëèëè ïàöèåíòîâ íà íåñêîëüêî âîçðàñòíûõ ãðóïï: ãðóïïà I ëåò (n = 12), ãðóï ïà II ëåò (n = 16), ãðóï ïà III ëåò (n = 24). Âñå ïà öè åí òû, ó à ñò âî âàâ - øèå â äàííîì èññëåäîâàíèè, íå èìåëè õðîíè åñêèõ çàáîëåâàíèé, ñïîñîáíûõ ïîâëèÿòü íà ñîñòîÿíèå ïîäêîæíî-æèðî - âîé êëåò àòêè ëèöà. Áîëüøèíñòâî ïàöèåíòîê èìåëè èçáû - òî íóþ ìàñ ñó òå ëà (èí äåêñ ìàñ ñû òå ëà (BMI) êã/ì 2 ) (n = 18) èëè îæè ðå íèå (BMI > 30 êã/ì 2 ) (n = 24). Âñåì ïà - öèåíòêàì îïåðàöèÿ ïî èñïðàâëåíèþ êîíòóðà ëèöà ïðîâåäåíà âïåðâûå.  òå åíèå ìåñÿöà ïîñëå îïåðàòèâíîãî âìåøàòåëüñòâà áîëüíûå íàõîäèëèñü ïîä íàáëþäåíèåì äëÿ âûÿâëåíèÿ âîçìîæíûõ ïîñëåîïåðàöèîííûõ îñëîæíåíèé. Àíà ëèç ïî ïó ëÿ öèé êëå òîê, âû äå ëåí íûõ èç îïå ðà öè îí íî ãî ìà òå ðè à ëà Îáðàçöû êëåòîê, âûäåëåííûõ èç îïåðàöèîííîãî ìàòåðèàëà, áûëè ïðîàíàëèçèðîâàíû íà ïðîòî íîì öèòîìåòðå. Ïåðâîíà àëüíûé ñêðèíèíã ïðîâîäèëè íà êàíàëàõ FSC/SSC, âûäå ëÿ ëè ãåé òû ïî ïó ëÿ öèé êëå òîê (ïðè ìåð íà ðèñ. 1). Äëÿ ïîä - ISSN

4 Ðèñ. 1. Àíàëèç îñíîâíûõ ïîïóëÿöèé êëåòîê, âûäåëåííûõ èç ïîäêîæ - íî-æè ðî âîé êëåò àò êè, ïðè ïëà ñ òè å ñêîé îïå ðà öèè íà ëè öå. Ðèñ. 2. Ñðàâíåíèå îáðàçöîâ êëåòîê, âûäåëåííûõ ïðè îïåðàöèè íà ëè - öå ó ïàöèåíòîâ ðàçíûõ âîçðàñòíûõ ãðóïï. Ïðåäñòàâëåíû äàííûå ïðîòî íîé öèòîìåòðèè êëåòîê, âûäåëåííûõ èç îáðàçöîâ òêàíè, ïîëó åííûõ ïðè îïåðàöèÿõ ïî êîððåêöèè ëèöà. Ïàöèåíòêè áûëè ðàç äå ëå íû íà ãðóï ïû ïî âîç ðà ñ òó (I ãðóï ïà ëåò (n = 12); II ëåò (n = 16); III ëåò (n = 24)). Îñíîâ íûå ïî ïó ëÿ öèè èçî ëè ðî - âàííûõ êëåòîê îáâåäåíû ãåéòàìè: R1 ýòî ýôðèí-ïîëîæèòåëüíûå (Eph-R+) ýïèòåëèàëüíûå êëåòêè, R2 îíêîñòàòèí Ì-ïîëîæèòåëüíûå (OSTM+) àäèïîöèòû, R3 - ëèìôîöèòû (CD3+), R4 - íåéòðîôèëû (CD66b+). òâåðæäåíèÿ ïîïóëÿöèîííîé ïðèíàäëåæíîñòè àíàëèçèðîâàëè ïðîöåíò àíòèãåí-ïîëîæèòåëüíûõ êëåòîê, ñïåöèôè åñêèõ â îòíîøåíèè ìàðêåðîâ íåéòðîôèëîâ (CD66b), ëèìôîöèòîâ (CD3), àäèïîöèòîâ (OSMR), ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê (Eph-R). Áûëè îáíàðóæåíû ðàçëè èÿ ïî ñîîòíîøåíèþ ïîïóëÿ - öèé êëåòîê, âûäåëåííûõ îò ïàöèåíòîê ðàçíûõ âîçðàñòíûõ ãðóïï: ó æåí ùèí ñòàð øå 50 ëåò (III ãðóï ïà) ïðî öåíò ëèì - ôîöèòîâ â êîæå ñíèæåí, íàèáîëüøåå êîëè åñòâî ïðåäñòàâëåíî ýïèòåëèàëüíûìè êëåòêàìè (ðèñ. 2). Â I ãðóïïå ïàöè - åíòîê ìîëîæå 40 ëåò â ñóñïåíçèè êëåòîê, âûäåëåííûõ èç ïîäêîæíî-æèðîâîé êëåò àòêè, áûë âûñîêèé ïðîöåíò èììóííûõ êëåòîê. Â ýòîé ãðóïïå æåíùèí ýïèòåëèàëüíûå êëåòêè è àäèïîöèòû èìåþò áîëüøèé ðàçìåð ïî ñðàâíåíèþ ñ êëåò êà ìè â äðó ãèõ ãðóï ïàõ, íà òî óêà çû âà åò èõ ðàñ ïî ëî - æåíèå â ñåòè êîîðäèíàò FSC/SSC. Îöåí êà ñïîí òàí íî ãî è èí äó öè ðî âàí íî ãî àïîï òî çà â êëåò êàõ ïîä êîæ íî-æè ðî âîé êëåò àò êè Êëåòêè æèðîâîé òêàíè èìåþò ðàçëè íûå ìåòàáîëè åñêèå õàðàêòåðèñòèêè â çàâèñèìîñòè îò ëîêàëèçàöèè [20]. Äëÿ ïîäêîæíî-æèðîâîé òêàíè ëèöà õàðàêòåðåí áîëåå èíòåíñèâíûé ìåòàáîëèçì, òî ñâÿçàíî ñ àêòèâíîñòüþ ìèìè åñêèõ ìûøö ëèöà, à òàêæå ïîäâåðæåííîñòüþ òêàíåé ëèöà âëèÿíèþ ýêñòðåìàëüíûõ âíåøíèõ âîçäåéñòâèé. Óðîâåíü ñïîíòàííîãî àïîïòîçà êëåòîê ëèöà çàâèñèò îò âíåøíèõ ôàêòîðîâ. Ïðîöåíò ñïîíòàííîãî àïîïòîçà îöåíèâàëè ïî îêðàñêå ôèêñèðîâàííûõ êëåòîê ïðîïèäèóìîì èîäèäîì â ãèïîòîíè å ñêîì áó ôå ðå, òî ïî çâî ëÿ åò îêðà ñèòü âñþ ÄÍÊ â êëåò êå. Íà ðèñ. 3À ïðè âå äåí ïðè ìåð ñïîí òàí íî ãî àïîï - òî çà â ãåé òå ýïè òå ëè à ëü íûõ êëå òîê: ïðà âûé ïèê ñî îò âåò - ñò âó åò äèï ëî èä íûì êëåò êàì, ëå âûé ïèê, îáî çíà åí íûé ìàð êå ðîì Ì1, ñî îò âåò ñò âó åò êëåò êà ìè â àïîï òî çå. èñ ëî - âûå äàí íûå ïî ïðî öåí òó ñïîí òàí íî ãî àïîï òî çà â ðàç íûõ ïî ïó ëÿ öè ÿõ êëå òîê, âû äå ëåí íûõ èç îïå ðà öè îí íî ãî ìà òå - ðè à ëà, ïðåä ñòàâ ëå íû â òàáë. 1. Äî ñòî âåð íûõ ðàç ëè èé ìåæ äó âîç ðà ñò íû ìè ãðóï ïà ìè íå âû ÿâ ëå íî. Äëÿ âû ÿâ ëå íèÿ òåõ êëå òîê, êî òî ðûå íà äàí íûé ìî ìåíò íå ïîãèáëè, íî â êîòîðûõ èíèöèèðîâàíû ñèãíàëüíûå ïó - òè àïîï òî çà (ëþ áî ãî òè ïà ðå öåï òîð íî-çà âè ñè ìî ãî, ìè - òîõîíäðèàëüíîãî è ò.ä.), âòîðè íûì ìåññåíäæåðîì êîòî - ðûõ ÿâ ëÿ åò ñÿ ïðè ðîä íûé Ñ6-öå ðà ìèä, èñ ïî ëü çó þò ìå òî - äèêó èíäóêöèè èëè óñèëåíèÿ ñèãíàëà. Ñòàíäàðòíûì ìå - òî äîì ÿâ ëÿ åò ñÿ ïðè ìå íå íèå êëå òî íî-ïðî íè êà þ ùå ãî Ñ2-öå ðà ìè äà, êî òî ðûé íå ÿâ ëÿ åò ñÿ åñ òå ñò âåí íûì äëÿ êëå - òîê, íî ñïî ñî áåí óñè ëè âàòü óæå àê òè âè ðî âàí íûå ñèã íà ëü - íûå ïóòè ïðîãðàììèðîâàííîé ãèáåëè êëåòîê. Ïðèìåð îêðàñêè ïðîïèäèóìîì èîäèäîì êëåòîê ïîñëå îáðàáîòêè èõ Ñ2-öåðàìèäîì ïðèâåäåí íà ðèñ. 3Â. Êîëè åñòâåííûå äàí íûå ïî èí äó öè ðî âàí íî ìó àïîï òî çó â ðàç íûõ ïî ïó ëÿ - öè ÿõ êëå òîê ïðåä ñòàâ ëå íû â òàáë. 2. Ïðè çíà èòåëüíîì ðàçáðîñå äàííûõ ìîæíî âûäåëèòü äâå ãðóïïû ïàöèåíòîâ ñ ìèíèìàëüíûìè è ìàêñèìàëüíûìè çíà- åíèÿìè óðîâíÿ èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà (ðèñ. 4). Äëÿ ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê ýòî ñîîòâåòñòâåííî 18 ± 4% è 37 ± 5%, äëÿ àäè ïî öè òîâ 18 ± 5% è 31 ± 4%. Äà ëü íåé øèé àíàëèç ïîëó åííûõ ðåçóëüòàòîâ ïîêàçàë, òî â III ãðóïïå èç 24 ïàöèåíòîê ó 8 áûëè ìàêñèìàëüíûå çíà åíèè èíäóöèðî - âàííîãî àïîïòîçà â ýïèòåëèàëüíûõ êëåòêàõ. Ýòî óêàçûâàåò íà âûñîêóþ âåðîÿòíîñòü ãèáåëè ýïèòåëèîöèòîâ ïîñëå îïåðàöèè ïî êîððåêöèè ëèöà ó ýòèõ ïàöèåíòîê. Òàêèì îáðàçîì, âîçðàñòíûå èçìåíåíèÿ êîæè îáóñëîâëèâàþò áîëåå âûñîêèé ðèñê ðàçâèòèÿ ïîñëåîïåðàöèîííûõ îñëîæíåíèé, ñâÿçàííûõ ñ ãèáåëüþ êëåòîê êîæè ïîñëå îïåðàöèè. 66 ÏÀÒÎÃÅÍÅÇ Ò. 14, ¹4

5 Ïðîöåíò ñïîíòàííîãî àïîïòîçà â ðàçíûõ ïîïóëÿöèÿõ êëåòîê, âûäåëåííûõ èç ïîäêîæíî-æèðîâîé êëåò àòêè ëèöà ó ïàöèåíòîê ðàçíûõ âîçðàñòíûõ ãðóïï Òàá ëè öà 1 Ãðóï ïû ïà öè åí òîâ I ëåò (n = 12) II ëåò (n = 16) III ëåò (n = 24) Ýïè òå ëè à ëü íûå êëåò êè 6,2 ± 0,5% 4,9 ± 0,9% 7,2 ± 0,8% Àäè ïî öè òû 3,7 ± 0,4% 3,5 ± 0,6% 4,2 ± 0,7% Íåé òðî ôè ëû 4,1 ± 0,7% 4,4 ± 0,5% 3,9 ± 0,7% Ëèì ôî öè òû 2,4 ± 0,6% 1,9 ± 0,4% 2,2 ± 0,5% Ñ2-öåðàìèä-èíäóöèðîâàííûé àïîïòîç â ïîïóëÿöèÿõ êëåòîê, âûäåëåííûõ èç ïîäêîæíî-æèðîâîé êëåò àòêè ó ïàöèåíòîê ðàçíûõ âîçðàñòíûõ ãðóïï ïðè êîððåêöèè ëèöà Ãðóï ïû ïà öè åí òîâ Òàá ëè öà 2 I ëåò (n = 12) II ëåò (n = 16) III ëåò (n = 24) Ýïè òå ëè à ëü íûå êëåò êè 18 ± 3% 24 ± 5% 36 ± 6%* Àäè ïî öè òû 12 ± 4% 18 ± 3% 29 ± 5%* Íåé òðî ôè ëû 5,3 ± 0,8% 5,4 ± 0,9% 5,8 ± 0,9% Ëèì ôî öè òû 5,8 ± 1,4% 6,5 ± 1,9% 6,9 ± 2,2% Ïðè ìå à íèå. * ð < 0,05 ïî ñðàâ íå íèþ ñ I è II ãðóï ïà ìè Òàá ëè öà 3 Îêðàñêà êëåòîê, âûäåëåííûõ èç îïåðàöèîííîãî ìàòåðèàëà ó ïàöèåíòîê ðàçíûõ âîçðàñòíûõ ãðóïï ïðè êîððåêöèè ëèöà, êðàñèòåëåì JC-1 äëÿ îïðåäåëåíèÿ ìåìáðàííîãî ïîòåíöèàëà ìèòîõîíäðèé Ó òåõ ïàöèåíòîê, êîòîðûå èìåëè âûñîêèé ïðîöåíò èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà, òàêæå óñòàíîâëåíî èçìåíåíèå ìåìáðàííîãî ïîòåíöèàëà ìèòîõîíäðèé ïî îêðàñêå JC-1. Ìèòîõîíäðèàëüíûé òèï àïîïòîçà õàðàêòåðåí äëÿ òåõ êëåòîê, êîòîðûå èìåþò íèçêèé ýíåðãåòè åñêèé ïîòåíöèàë. Èçìåíåíèå ôëóîðåñöåíöèè êðàñèòåëÿ JC-1 îòðàæàåò ïàäåíèå ìåìáðàííîãî ïîòåíöèàëà ìèòîõîíäðèé, òî, îäíàêî, íå âñåãäà ÿâëÿåòñÿ îòðàæåíèåì àïîïòîçà, íî ìîæåò áûòü ïðè äðóãèõ ïàòîëîãè åñêèõ ñîñòîÿíèÿõ êëåòêè. Îêèñëèòåëüíûé ñòàòóñ âëèÿåò íà ïðîëèôåðàöèþ è äèôôåðåíöèðîâêó êëåòîê, à ìåòàáîëè åñêàÿ àêòèâíîñòü ìèòîõîíäðèé ÿâëÿåòñÿ èíäèêàòîðîì àêòèâíîñòè àíòèîêñèäàíò - íûõ ôåðìåíòîâ. åì íèæå óðîâåíü ãåíåðàöèè ñâîáîäíûõ ðàäèêàëîâ, òåì âûøå ïîòåíöèàë êëåòîê ê âûæèâàíèþ [21]. Ïî íàøèì äàííûì, ýíåðãåòè åñêèé ïîòåíöèàë êëåòîê êîæè äîñòîâåðíî óìåíüøàåòñÿ ñ âîçðàñòîì, òî, âåðîÿòíî, îêàçûâàåò âëèÿíèå íà òå åíèå ïîñëåîïåðàöèîííîãî ïåðèîäà ó ïàöèåíòîê ïîñëå êîððåêöèè ëèöà. Ãðóï ïû ïà öè åí òîâ I ëåò (n = 12) II ëåò (n = 16) III ëåò (n = 24) Èí òåí ñèâ íîñòü îêðà ñ êè JC-1 (me an*) âñåõ êëå òîê 121 ± 12% 105 ± 9% 92 ± 8% Ïðè ìå à íèå. ð < 0,05; *me an èí òåí ñèâ íîñòü ôëó î ðåñ öåí öèè îá ðàç öîâ êëå òîê, â óñëîâ íûõ åäè íè öàõ Àíà ëèç ïî ñëå î ïå ðà öè îí íî ãî ïå ðè î äà Â òå å íèå ìå ñÿ öà ïî ñëå ïðî âå äåí íîé ïëà ñ òè å ñêîé îïåðàöèè ïðîâîäèëîñü äèíàìè åñêîå íàáëþäåíèå çà ïà - öèåíòàìè. Òÿæåëûõ ïîñëåîïåðàöèîííûõ îñëîæíåíèé âû - ÿâ ëå íî íå áû ëî, îä íà êî ó 3 áî ëü íûõ áû ëà èí ôè öè ðî âà íà îáëàñòü îïåðàöèîííîãî øâà (1,56%), ýòè æåíùèíû îòíî - ñèëèñü ê ðàçíûì âîçðàñòíûì ãðóïïàì. Ó 11 áîëüíûõ áûëè óäëèíåíû ñðîêè çàæèâëåíèÿ ïîñëåîïåðàöèîííîé ðàíû (5,72%), îáó ñëîâ ëåí íûå à ñ òè íûì êàï ñó ëè ðî âàí íûì íå - êðîçîì; 8 èç ýòèõ áîëüíûõ îòíîñèëèñü ê III âîçðàñòíîé ãðóï ïå, 3 êî II ãðóï ïå. Ïî êà çà òå ëè èí äó öè ðî âàí íî ãî àïîï òî çà äëÿ ýòèõ 11 áî ëü íûõ áû ëè 39 ± 1% è 32 ± 2% ñî - Ðèñ. 3. Ïðèìåðû îöåíêè ñïîíòàííîãî (À) è èíäóöèðîâàííîãî (Â) àïîï - òîçà â ãåéòå ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê. Ïðåäñòàâëåíû äàííûå ïðîòî íîé öèòîìåòðèè. Âñå êëåòêè áûëè ôèê - ñè ðî âà íû è îêðà øå íû ïðî ïè äè ó ìîì èîäè äîì â ãè ïî òî íè å ñêèì áó - ôå ðå, òî äà ò âîç ìîæ íîñòü ïî êà çàòü âñþ ÄÍÊ êëåò êè. Ïðà âûé ïèê ñîîòâåòñòâóåò äèïëîèäíûì êëåòêàì. Ëåâûé (ñóáäèïëîèäíûé) ïèê ñî - îòâåòñòâóåò êëåòêàì â àïîïòîçå, îí îáîçíà åí ìàðêåðîì Ì1. ISSN

6 Ðèñ. 4. èñëîâûå çíà åíèÿ óðîâíÿ èíäóöèðîâàííîãî àïîïòîçà â ãåéòå ýïè òå ëè à ëü íûõ êëå òîê è àäè ïî öè òîâ ó âñåõ ïà öè åí òîê. Ïðåäñòàâëåíû èñëîâûå ðåçóëüòàòû ïðîòî íîé öèòîìåòðèè, êàæäàÿ òî êà ñîîòâåòñòâóåò èíäèâèäóàëüíîìó ïîêàçàòåëþ äëÿ áîëüíîãî. îò âåò ñò âåí íî, äëÿ ýïè òå ëè î öè òîâ è àäè ïî öè òîâ, òî åñòü ìàê ñè ìà ëü íûå çíà å íèÿ. Ó äâóõ ïà öè åí òîê ñòàð øå 50 ëåò áûë âû ðà æåí íûé íå - êðîç ìÿã êèé òêà íåé â îá ëà ñ òè îïå ðà öè îí íî ãî ðóá öà (1,04%), òî ïî òðå áî âà ëî ïðî âå äå íèÿ äî ïîë íè òå ëü íîé îïåðàöèè ïî èññå åíèþ ïàòîëîãè åñêèõ òêàíåé. Ïðè èíäè âè äó à ëü íîì àíà ëè çå èñ òî ðèé áî ëåç íè óñòà íîâ ëå íî, òî ó ýòèõ áî ëü íûõ áûë âû ñî êèé óðî âåíü èí äó öè ðî âàí íî ãî àïîï òî çà êëå òîê, âû äå ëåí íûõ èç îá ëà ñ òè îïå ðà òèâ íî ãî âìåøàòåëüñòâà (42% è 43% äëÿ ýïèòåëèîöèòîâ è 35% è 39% äëÿ àäèïîöèòîâ). Òàêèì îáðàçîì, ñ âîçðàñòîì ó æåíùèí ïîâûøàåòñÿ ïðîöåíò ïîñëåîïåðàöèîííûõ îñëîæíåíèé, ñâÿçàííûõ ñ à ñ òè íûì íå êðî çîì òêà íåé, òî ñî îò âåò ñò âó åò ìàê ñè - ìàëü íî ìó ïðî öåí òó öå ðà ìèä-èí äó öè ðî âàí íî ãî àïîï òî çà êëå òîê êî æè, âû äå ëåí íûõ èç îïå ðà öè îí íî ãî ìà òå ðè à ëà. Âûâîäû 1. Ñîñòîÿíèå êëåòîê ïîäêîæíî-æèðîâîé êëåò àòêè, à òàê æå àê òè âà öèÿ â íèõ ñèã íà ëü íûõ ïó òåé àïîï òî çà, ÿâ ëÿ - åòñÿ ïàòîôèçèîëîãè åñêîé îñíîâîé äëÿ ðàçâèòèÿ ïîñëå - îïåðàöèîííûõ îñëîæíåíèé. 2. Ìàêñèìàëüíûé ïðîöåíò öåðàìèä-èíäóöèðîâàííîãî àïîï òî çà â êëåò êàõ ýïè òå ëèÿ è àäè ïî öè òîâ, âû äå ëåí íûõ èç îïå ðà öè îí íî ãî ìà òå ðè à ëà, çà ðå ãè ñò ðè ðî âàí ó ïà öè åí - òîê â âîç ðà ñ òå ñòàð øå 50 ëåò, òî ñî ïðÿ æå íî ñ ïî âû øåí - íûì ðèñêîì ðàçâèòèÿ òàêèõ îñëîæíåíèé ïîñëå ëèôòèíãà ëè öà, â âè äå à ñ òè íî ãî íå êðî çà òêà íåé â îá ëà ñ òè îïå ðà - öè îí íî ãî øâà è óä ëè íå íèÿ âðå ìå íè çà æèâ ëå íèÿ ïî ñëå - îïåðàöèîííîé ðàíû. References 1. Mut lu O., Yasak T., Ege men O., Kay a di bi T., Ta sa siz K. The use of sub men tal ar te ry per fo ra tor is land flap wit ho ut in c lu ding di gas t - ric mus c le in the re con s t ruc ti on of lo wer fa ce and in t ra o ral de fects. J. Craniofac. Surg. 2016; 27(4): e Lan da D., van Dis ho eck A., Stey er berg E., Ho vi us S. Qu a li ty of me a su re ments of acu te sur gi cal and tra u ma tic wo unds using a di gi tal wo und-ana ly sing to ol. Int. Wo und J. 2016; 13(5): Go der M., Kor n ha ber R., Bor do ni D., Win k ler E., Ha ik J., Tes - so ne A. Cu ta neo us ba sal cell car ci no ma ari sing wit hin a ke lo id scar: a ca se re port. Onco Targets Ther. 2016; 9: Agar wal P., Ku mar A., Shar ma D. Fe a si bi li ty of ty pe III ve no us flap in co ve ra ge of hand de fects fol lo wing tra u ma and burns. J. Clin. Orthop. Trauma. 2016; 7(Suppl 2): Ci han di de E., Kay i ran O., Aydin E., Uzu nis ma il A. A new ap pro ach for the correction of prominent ear deformity: The distally based perichondrio-adipo-dermal flap technique. J. Craniofac. Surg. 2016; 27(4): Hu W., Hen ry A., Lu cas C., Ta P., Phi lan d ri a nos C., Ker fant N. Mic ro sur gi cal rep lan ta ti on of a two-seg ment to tal scalp avul si on. J. Craniofac. Surg. 2016; 27(4): Heo Y., Yagi S., To riy a ma K., Ta ka na ri K., Fu ji mo to Y., Nis - hio N. et al. Re la ti on s hip bet we en BMI and po sto pe ra ti ve com p li ca ti - ons with free fap in an te ro la te ral cra ni o fa ci al re con s t ruc ti on. Plast. Re - constr. Surg. Glob. Open. 2016; 4(3): e Hor bach S., Lok horst M., Sae ed P., de Gouy on Ma tig non de Pon - to u ra u de C., Rot ho va A., van der Horst C. Scle rot he ra py for low-flow vas - cular malformations of the head and neck: A systematic review of sclerosing agents. J. Plast. Re constr. Aes t het. Surg. 2016; 69(3): Sun Z., Zhu G., Wang H., Xu X., Cai B., Zeng L. et al. Cli ni cal out co mes of im pen ding na sal skin ne cro sis re la ted to no se and na so la - bi al fold aug men ta ti on with hy a lu ro nic acid fil lers. Plast. Re constr. Surg. 2015; 136(4): 434e-441e. 10. Un ga rel li L., He tem C., Fa ri na Ju ni or J. Is it sa fe to ope ra te on patients taking isotretinoin? Aes t he tic Plast. Surg. 2016; 40(1): Kim S., Kim J., Hwang K. Skin ne cro sis of the no se af ter in jec ti on of ri - bose cross-linked porcine atelocollagen. J. Craniofac. Surg. 2015; 26(7): Sa li bi an A., Ro sa rio A., Se ve ro Lde A., Nguy en L., Ba ny - ard D., To ran to J. et al. Cur rent con cepts on burn wo und con ver si - on-a re vi ew of re cent ad van ces in un der s tan ding the se con da ry pro - gres si ons of burns. Burns. 2016; 42(5): Mes sner F., Gra ham mer J., Ha utz T., Bran dac her G., Schne - e ber ger S. Is c he mia/re per fu si on in ju ry in vas cu la ri zed tis sue al lot ran s - p lan ta ti on: tis sue da ma ge and cli ni cal re le van ce. Curr. Opin. Or gan. Transplant. 2016; 21(5): Aydin D., Berg J. Sub cu ta neo us en cap su la ted fat ne cro sis. Clin. Ca se Rep. 2016; 4(4): Elks C., Zhao P., Grant R., Hang H., Ba i ley J., Burk D. et al. Loss of oncostatin M signaling in adipocytes induces insulin resistance and adipose tissue inflammation in vi vo. J. Bi ol. Chem. 2016; 291(33): Pe rez Whi te B., Get si os S. Eph re cep tor and ep h rin fun c ti on in bre ast, gut, and skin epit he lia. Cell. Adh. Migr. 2014; 8(4): Kan da lo va O.V., Ta ra tu ti na N.V., Mar ti no va E.A. Spon ta neo - us and ce ra mi de-in du ced apop to sis in the skin cells ob ta i ned from pa - tients with atopic dermatitis, eczema, and psoriasis, compared with do nors. Pathogenesis (in Russian), 2012, 10(4): Becton Dickinson Book, 2014, ( - ces.com/ds/ab/others/551302_book_website.pdf) 19. Krug li kov I., Tru jil lo O., Kris ten Q., Isac K., Zor ko J., Fam M. et al. The facial adipose tissue: A revision. Facial Plast. Surg. 2016; 32(6): Per ri ni S., La vi o la L., Cig na rel li A., Mel c hi or re M., De Ste fa - no F., Cac ci op po li C. et al. Fat de pot-re la ted dif fe ren ces in ge ne ex p - res si on, adi po nec tin sec re ti on, and in su lin ac ti on and sig nal ling in hu - man adi po cy tes dif fe ren ti a ted in vit ro from pre cur sor stro mal cells. Di - abetologia. 2008; 51(1): Ber to lo A., Ca pos se la S., Frankl G., Ba ur M., Po tzel T., Stoy - anov J. Oxidative status predicts quality in human mesenchymal stem cells. Stem Cell Res. Ther. 2017; 8(1): 3-8. Ñâåäåíèÿ îá àâòîðàõ: Ìîðîçîâ Ñåðãåé Ãåîðãèåâè (Mo ro zov S.G.), äîê òîð ìåä. íà óê, ïðî ôåñ ñîð, ëåí-êîðð. ÐÀÍ, äè ðåê òîð Ôåäåðàëüíîãî ãîñóäàðñòâåííîãî áþäæåòíîãî íàó íîãî ó ðåæäåíèÿ «Íàó íî-èññëåäîâàòåëüñêèé èíñòèòóò îáùåé ïàòîëîãèè è ïàòîôèçèîëîãèè», biopharm@list.ru. Àá ðà ìÿí Øìà âîí Ìî è ñî âè (Ab ra mi an Sh. M.), ìëàäøèé íàó íûé ñîòðóäíèê ëàáîðàòîðèè ðåãóëÿöèè ðå - ïàðàòèâíûõ ïðîöåññîâ ÔÃÁÍÓ «Íàó íî-èññëåäîâàòåëüñêèé èíñòèòóò îáùåé ïàòîëîãèè è ïàòîôèçèîëîãèè». 68 ÏÀÒÎÃÅÍÅÇ Ò. 14, ¹4