EFECTELE IN VIVO ALE CALCITONINEI ASUPRA SÂNGELUI LA ŞOBOLANII WISTAR DE VÂRSTE DIFERITE Dorina Pop, Rodica Giurgea

Size: px

Start display at page:

Download "EFECTELE IN VIVO ALE CALCITONINEI ASUPRA SÂNGELUI LA ŞOBOLANII WISTAR DE VÂRSTE DIFERITE Dorina Pop, Rodica Giurgea"

Jocelyn Preston
5 years ago
Views:

1 EFECTELE IN VIVO ALE CALCITONINEI ASUPRA SÂNGELUI LA ŞOBOLANII WISTAR DE VÂRSTE DIFERITE Dorina Pop, Rodica Giurgea INSTITUTUL DE CERCETĂRI BIOLOGICE, CLUJ NAPOCA IN VIVO EFFECTS OF CALCITONIN ON WISTAR RATS BLOOD AT DIFFERENT AGE Abstract. Calcitonin, is a liophylizated salmon extract (Calsyn R50 Rover S.A., Gennevilliers) administrated in a dose of 1 U.I./ 100 g body weight at healthy prepubescent and pubescent Wistar rats, daily, during 3 days. It affects some hematologic parameters (hematocrit, VSH, red blood cells number, leukocytes) and the seric proteic factors (as: albumines, alfa1, alfa2, beta and gamaglobulines). The effects have been noticed at 1, 3 and 8 days since the calcitonin was administrated for the last time. The registrated modifications were quickly produced, being found out frequently at the prepubescent rats, and influenced by their age. Key words: calcitonin, rats, blood effects Rezumat. Calcitonina, un extract liofilizat de somon (Calsyn R50 Rover S.A., Gennevilliers) administrat timp de 3 zile, zilnic în doză de 1 U.I./100 g greutate corp la şobolanii Wistar sănătoşi, prepuberi şi puberi, afectează unii parametrii hematologici (hematocrit, VSH, numărul de hematii şi leucocite) şi facţiunile proteice serice (albumine, alfa1, alfa2, beta şi gamaglobuline). Efectele au fost urmărite la 1,3 şi 8 zile de la ultima administrare a calcitoninei. Modificările sunt rapide, mai frecvente la prepuberi şi influenţate de vârsta şobolanilor. Introducere Majoritatea datelor din literatură sunt obţinute la om, în condiţii patologice (Betea şi colab.m, 2004; Griveas şi colab., 2006), lipsind pe animalele de laborator sănătoase. Datele existente la om, se referă la stările de hipo sau hiperparatiroidism, asociate cu prezenţa unor tumori (Howell şi colab., 2003; Kebebew, 2001; Kebebew şi colab., 2001; Zhang şi colab., 2003) sau de concentraţia calciului seric (Betea şi colab.m, 2004). Acestea au fost motivele pentru care, în această lucrare, am urmărit modul de acţiune al calcitoninei la şobolanul Wistar de vârste diferite (pre puberi şi puberi), sănătoşi, fiind ştiut că reactivitatea organismului este diferită în funcţie de dezvoltarea ontogentecică. Material şi metode Experienţele au fost efectuate pe şobolani Wistar, femele, sănătoase, prepuberi (100±5 g greutate corp) şi puberi (250±5 g greutate corp). Aceştia au fost grupaţi în două loturi: lot tratat cu calcitonină şi lot martor, fiecare lot fiind alcătuit din 15 indivizi. Condiţiile de întreținere au fost corespunzătoare (densitate, temperatură, lumină, curenţi de aer, etc,). Hrana a fost conformă stasului. Atât hrana, cât şi apa sau dat ad libitum. Calcitonina (Calsyn R50 Rover S. A., Genevilliers) a fost un extract obţinut din celulele parafoliculare de salmonid, liofilizat. Doza de calciton 100 g greutate corp, la ambele vârste, timp de 3 zile, zilnic. Administrarea sa făcut intramuscular, iar efectele au fost urmărite la 1,3 şi 8 zile de la ultima administratre a hormonului. Lotul martor a 178

2 fost tratat asemănător, dai în loc de calcitonină li sa administrat ser fiziologic pentru a evita stresul de mânuire. Pentru sacrificarea de la 1 şi 3 zile sa utilizat acelaşi lot martor. Sacrificarea şobolanilor sa făcut prin decapitare, după o inaniţie prealabilă de 16 ore. Din sângele integral, necoagulat s au dozat parametrii hematologici (hematocrit, VSH, număr de hematii şi leucocite) prin metodele clasice. Fracţiunile proteice serice (albumine, alfa 1, alfa2, beta şi gamaglobulinele) au fost separate la aparatul Beckman Paragon, în gel de agar, tampon trisbarbital, timp de 15 minute la 100 V, ph = 8,6, forţa ionică 0,05 (Ghergariu şi colab., 2000). Concentraţia de calciu seric sa determinat prin metoda spectrofotometrică cu absorbţie atomică şi prin metoda complexometrică cu EDTA N/100, in paralel. Cantitatea de calciu sa exprimat în mg/100 ml ser. Cele două metode utilizate în dozarea calciului, nu au dat valori diferite, semnificative. Datele obţinute au fost prelucrate statistic prin testul t al lui Student (Snedecor şi Cochram, 1978; Weber, 1980). Semnificaţia statistică sa considerat de la p<0,05. Sa calculat şi diferenţa procentuală faţă de martor (). Rezultate şi discuţii Cantitatea de Ca 2+ din serul sanguin la şobolanii prepuberi scade rapid, după administrarea calcitoninei cu 23,16% (p<0,01) la 24 de ore de la ultima injectare a calcitoninei şi cu 12,61% (p<0,05) la trei zile, față de martor. La şobolanii puberi scăderea calciului seric este de scurtă durată, la 24 de ore, scăderea fiind de 10,87% (p<0,05), urmată de o revenire la normal. Efectul hipocalcemic al calcitoninei este rapid si de scurtă durată, mai cu seamă la sobolanii prepuberi. Aceste observaţii sunt unanim acceptate în literatura de specialitate, calcitonina în antagonism cu parathormonul induce o hipocalcemie (Cucuianu şi colab., 1998). Pe fondul hipocalcemiei semnalate de noi, se remarcă unele modificări semnificative ale unor parametrii sanguini. La şobolanii prepuberi VSHul înregistrează o scădere, care se menţine si la 8 zile. O scădere imediată, statistic semnificativă, apare şi în cazul hematocritului, dar numai la 3 zile. Leucocitele nu sunt afectate, în schimb creşte numărul de hematii la 8 zile. La şobolanii puberi, scăderea VSHului este rapidă şi accentuată în primele 3 zile după tratament, cu reveniri la valorile normale la opt zile. Numărul de hematii nu este afectat, în schimb, leucocitele cresc semnificativ la 24 de ore (Tabel 1 şi 2). Tabel 1. Modificări hematologice (VSH viteza de sedimentare a hematiilor, numărul de hematii (H) şi leucocite (L) şi hematocritul (Ht) cât şi fracţiunile proteice serice (albumine Al, alfa1 şi alfa2, beta şi gamaglobuline) la şobolanii Wistar prepuberi, în urma tratamentului acut cu calcitonină. Sacrificări (zile) Lot Martor Tratat Tratat Martor Tratat VSH X ± 1,30± 0,60± 0,77± 0,83± 1,52± (mm) ES 0,18 0,09 0,1 0,14 0,07 +53,85 40,77 37,35 H X ± (x10 6 ) ES L X ± (x10 3 ) ES 4,38± 6,41± 0,27 4,21± 0,21 3,89 7,45± 0,49 +16, ,77± +31,73 7,00± 0,82 +9,09 8,40± 1,10 7,61± 0,70 8,06± 1,02 4,05 8,13±

3 Ht X ± Al X ± Alfa1 X ± Alfa2 X ± Beta X ± Gama X ± 36,88± 0,77 52,17± 1,23 12,67± 0,83 11,47± 0,51 14,57± 1,12 9,10± 0,58 34,11± 1,11 7,52 51,14± 0,74 1,98 13,10± +3,39 13,40± 0,86 +16,82 10,00± 0,88 31,37 12,36± 0,97 +35, ,23± 1,34 +3,66 51,97± 0,80 0,39 12,70± 0,79 +0,23 9,72± 15,26 15,19± 1,22 +4,25 1± 0,93 +14,50 50,71± 5,02 53,12± 2,07 13,38± 0,47 10,59± 0,30 12,71± 1,07 10,20± 0,65 45,95± 1,06 9,39 56,40± 2,74 +6,17 12,85± 0,91 3,97 12,85± 0,91 3,97 8,17± 0,76 35,72 10,11± 0,74 0,89 A/G 2,90 1,04 1,08 2,13 1,29 Nota: Sunt trecute valorile medii şi eroarea standard ( X ±ES). Semnificaţia statistică este considerată de la p<0,05. = diferenţa procentuală faţă de martor; Diferenţele semnificative sunt subliniate. Pentru sacrificările la 1 şi 3 zile de la ultima injectare cu calcitonină este un singur lot martor. Tabel 2. Modificări hematologice (VSH viteza de sedimentare a hematiilor), numărul de hematii (H) şi leucocite (L) şi hematocritul (Ht), cât şi fracţiunile proteice serice (albumine Al, alfa1, alfa2, beta şi gamaglobuline) la şobolanii Wistar puberi, în urma tratamentului acut cu calcitonină. Sacrificări (zile) Lot Martor Tratat Tratat Martor Tratat VSH X ± 2,04± 0,54± 0,95± 1,70± 1,68± (nn) ES 0,25 0,02 0,11 0,15 0,24 +73,53 58,34 1,18 H X ± (x10 6 ) ES L X ± (x10 3 ) ES Ht X ± Al X ± Alfa1 X ± 6,70± 0,35 5,16± 2,32 36,88± 0,77 51,07± 1,07 11,65± 0,39 6,57± 0,87 0,20 9,00± 5,45 +34,32 34,11± 1,11 7,52 50,65± 0,67 0,83 12,60± 0,66 +8,13 5,90± 0,51 11,95 4,13± 2,64 19,90 38,23± 1,34 +29,64 49,82± 1,59 2,45 12,20± 0,84 +4,72 6,35± 0,53 4,76± 0,53 50,71± 2,63 45,85± 1,51 14,37± 0,57 5,93± 0,60 6,62 8,13± 4,70± 2,56 1,40 52,80± 3,76 +36,89 13,57± 1,54 5,57

4 Alfa2 X ± Beta X ± Gama X ± 17,05± 0,57 17,05± 9,62± 16,20± 0,36 4,99 16,20± 0,36 4,99 8,20± 0,47 14,08 18,57± 1,17 +8,91 18,57± 1,17 +8,91 9,42± 0,26 2,08 18,85± 1,15 18,85± 1,15 10,20± 0,43 15,00± 1,35 24,43 15,00± 1,35 24,43 9,40± 7.85 A/G 1,05 1, ,02 Nota: Sunt trecute valorile medii şi eroarea standard ( X ±ES). Semnificaţia statistică este considerată de la p<0,05. = diferenţa procentuală faţă de martor. Diferenţele semnificative sunt subliniate. Pentru sacrificările de la 1 şi 3 zile de la ultima injectare cu calcitonină este un singur lot martor. Din aceleaşi tabele se poate constata că la şobolanii de ambele vârste, fracţiuneea alfa1 nu se modifică sub tratament acut cu hormon. La şobolanii prepuberi nu este afectată albumina, în schimb la cei puberi apare o creştere semnificativă la 8 zile. Diferenţe în funcţie devârstă apar în cazul gamaglobulinei care scade la şobolanii puberi şi creşte la cei prepuberi. Raportul A şi G la şobolanii de ambele vârste se menţine scăzut faţă de martor, exceptând şobolanii puberi, care la 8 zile după tratament creşte. Efectele calcitoninei pot fi explicate acţiunii rapide a acesteia asupra organismului, dar şi unui mecanism de reglare pe termen scurt a concenrtaţiei calciului ionic (Cucuian şi colab., 1998). Variaţiile concentraţiei de calciu din sânge pot modifica încărcarea electrică a elementelor figurate, modificări ce se reflectă în valorile hematocritului şi ale VSHului. Un studiu efectuat de Nakamoto şi colab., în 1999, Si de Griveas şi colab., în 2006, ne arată că în hipoparatiridism secundar, asociat cu insuficienţă renală (pacient cu dializă) are loc o alterare a sistemului de apărare, fiind afectată imunitatea celulară, paralel cu creşteri ale nivelului albuminei serice şi a hematocritului, mai cu seama după ablaţia glandei. Acest efect se accentuează după 12 luni de la eliminarea parotidei. Noi 181 găsim, la şobolanii adulţi o creştere la 3 zile de la injectarea calcitoninei a hematocritului, si la opt zile creşterea semnificativă a fracţiunii albuminice. Creştrerea concentraţiei de gamaglobuline înregistrat la şobolanii prepuberi poate semnifica o stimulare a proceselor imunologice. Un rol major în reacţiile organismului faţă de hormonii paratiroidei revine IL6, un factor stimulator al limfocitelor B, acre induce secreţia de imunoglobuline (Nicola, 1997). IL6 este considerat o citokină secretată si de osteoblaste, ca răspuns la hormonii paratiroidei, intervenind asupra osteoclastelor şi determinând apariţia osteoporozei (Greenfield şi colab., 1993; 1995; Saflez şi colab., 2004). Concluzii Calcitonina afectează parametrii hematologici şi fracţiunile proteice serice, rapid, dependent de vârsta şobolanilor. Bibliografie Betea, D., Bradwell, A.R., Harvez, T.C., Mead, G.P., SchmidtGazk, B., Ghaze, B., Daly, A.F., Beckers, A., Hormonal and biochemical cel normalization and tumor shrinkage induced bz anti+parathzroid hormone immunotherapy in a patient with metastatic parathyroid carcinoma. J. Clin. Endocrinol. Metab., 89, , 2004

5 Cucuianu, M., Crîsnic, S., PlescaManea, I., Biochimie clinică. Fundamentare fiyiopatologică, Ed., Dacia, ClujpNapoca, 1998 Ghergariu, S., Pop, A., Kadar, L., Spînu, M., Manual de laborator clinic veterinar, Ed. All Educational, Bucureşti, 2000 Greenfield, E., Gornik, S., Horowitz, M., Donahue, H., Shaw, S., Regulation of cytokine expression in osteoblast bz parathzroid hormones rapid stimulation of interleukin 6 and leukemia inhibitorz factor mrna, J. Bone Miner Res., 8, , 1993 Greenfield, E., Gornik, S., Shaw, S., Banks, A., Adenilcyclase and inteleukin 6 are downstream effectors of parathiroid hormone resulting in stimulation of bone resorption, I. Clin. Invest., 96, , 1995 Griveas, I., Papadopoulou, D., Fleva, A., Visvardis, G., Pavliton, A., Sakellariou, G., Effect of parathiroid hormone on cellular immunity in uremic patients undergoing peritoneal dialysis, Daily Transp. 35, , 2006 Howell, Y.M., Haven, C.I., Kahnoski, K., Khoo, S.K., Pettilo, D., Chen, I., Fleuren, G.J., HRPT2 mutations are associated with malignancz in sporadic parathzroid tumors, j. Med. Genet., 40, , 2003, Kebebew, E., Parathyroid carcinoma, Curr. Treat. Options Oncol., 2, , 2001 Kebebew, E., Arici, C., Duh., Q.I., Clark, O.H., Localization and reparation results for persistaent and recurrent parathyroid carcinoma, Arch. Surg. 136, , 2001 Nakamoto, I.C., Matsuo, K., Nishihara, G., Yoshida, T., Goya, T., Effects of parahtyroiddectomy on the immune system and nutritional condition in chronic dialysis patients with secondary hyperparathyroidism, Am. J. Surg. 178, , 1999 Nicola, N.A., Guidebook to cytokines and their receptors, Oxford, Univ. Press., Oxford New York, Tokyo, 1997 Safley, S.A., Yillinger, F., Jackson, E.H., TuckerBurden, C., Cohen, C., Weber, C.J., Interleukin 6 production and secretion by human parathyroidis, Clin. Exp. Immunol., 136, 19, 2004 Snedecor, G., Cochram, W., Statistical methods 6 th ed. Iowa State Univ, Press., Annes Iowa, 1978 Zhang, L, Conejogarcia, I.R., Katsaros, D., Gimotti, P.A., Masobrio, M., Reghani, G., Intratumoral T cells recurrence and survival in epithelial ovarian cancer, N. Engl. I. Med. 348, , 2003 Weber, E., Grundriss der Biologischen Statistik, Veb Gustav Fischer, Vevlag Jena Ed. 8 a,

VISUAL FOX PRO VIDEOFORMATE ŞI RAPOARTE. Se deschide proiectul Documents->Forms->Form Wizard->One-to-many Form Wizard

VISUAL FOX PRO VIDEOFORMATE ŞI RAPOARTE Fie tabele: create table emitenti(; simbol char(10),; denumire char(32) not null,; cf char(8) not null,; data_l date,; activ logical,; piata char(12),; cap_soc number(10),;