PASTOREX STAPH-PLUS 1 x x Test de Aglutinare Latex Pentru Identificarea Staphylococcus Aureus

Size: px

Start display at page:

Download "PASTOREX STAPH-PLUS 1 x x Test de Aglutinare Latex Pentru Identificarea Staphylococcus Aureus"

Abraham Cain
5 years ago
Views:

1 PASTOREX STAPH-PLUS 1 x x Test de Aglutinare Latex Pentru Identificarea Staphylococcus Aureus /01 1- INTERESUL CLINIC PASTOREX STAPH-PLUS este un test rapid de aglutinare pe lamă pentru detecţia simultană a factorului de afinitate pentru fibrinogen (clumping factor), a proteinei A şi a polizaharidelor capsulare de Staphylococcus aureus. 2- REZUMATUL ŞI EXPLICAŢIA TESTULUI Staphylococcus aureus este unul din germenii patogeni cel mai adesea izolaţi din prelevatele clinice. Diferenţierea rapidă între această specie şi alte specii mai puţin virulente de stafilococi, are importanţă majoră în gestionarea adecvată a abordului medical al bolnavilor. Testul de detecţie a producţiei libere de coagulază permite identificarea Staphylococcus aureus (11, 12). Cu toate acestea, acest test necesită 4 până la 24 de ore, iar plasma poate prezenta variaţii de la lot la lot, ce modifică reacţia (16). Au fost puşi la punct reactivi de aglutinare ce permit o detecţie mai rapidă şi mai fiabilă a Staphylococcus aureus (3). Aceste teste de aglutinare sunt alcătuite din latex sensibilizat cu fibrinogen şi IgG, în vederea detectării factorului de afinitate pentru fibrinogen şi a proteinei A, ambele reprezentând caracteristici biochimice specifice S. aureus. S-a observat totuşi că anumite tulpini de Staphylococcus aureus (în principal cele rezistente la meticilină) nu sunt aglutinate cu aceste teste (15). Un studiu vizând aceste tulpini a arătat că toate posedă polizaharide capsulare (4). Prin urmare se poate admite că, capsula polizaharidică ce acoperă total bacteria în anumite condiţii (izolare directă, cultură, clonare bacteriană), maschează proteina A şi factorul de afinitate pentru fibrinogen şi astfel împiedică aglutinarea particulelor de latex sensibilizate numai cu fibrinogen şi IgG. 3- PRINCIPIUL TESTĂRII PASTOREX STAPH PLUS este conceput să permită detecţia simultană a următoarelor 3 componente: 1- factorul de afinitate pentru fibrinogen, cunoscut şi sub denumirile de coagulază legată sau factor de aglutinare (clumping factor); 2- proteina A ce posedă o afinitate pentru fragmentul cristalizabil (Fc) al gama-globulinelor (IgG); 3- polizaharidele capsulare de Staphylococcus aureus. Reactivul este alcătuit din particule de latex sensibilizate cu fibrinogen şi IgG, precum şi cu anticorpi monoclonali specifici de polizaharidele capsulare ale Staphylococcus aureus (1, 5, 6, 8, 10) (brevet Institut Pasteur). Asocierea într-un reactiv unic a fibrinogenului, a IgG şi a anticorpilor monoclonali anti-capsulari permite recunoaşterea atât a tulpinilor de Staphylococcus aureus puternic capsulate, cât şi a celor slab capsulate. Într-adevăr, pentru suşele puternic capsulate, aglutinarea bacteriilor este realizată de anticorpii anti-polizaharide capsulare. Pentru suşele sensibile ce şi-au pierdut capsula polizaharidică, bacteriile sunt aglutinate de fibrinogen şi IgG. Izolatele din culturi de Staphylococcus aureus sunt amestecate pe lamă (sau card de aglutinare) cu reactivul latex. După amestecarea completă, lama se examinează cu ochiul liber: formarea aglutinatelor indică prezenţa Staphylococcus aureus. 4- PREZENTARE 1. PASTOREX STAPH-PLUS, trusă de 50 de teste, cod 56356, conţine : Latex test: 1 flacon cu picurător cu 1 ml de latex roşu sensibilizat cu solutie de albumina bovina, fibrinogen, IgG şi anticorpi monoclonali anti-polizaharide capsulare de Staphylococcus aureus. Conservant: <1.5 % ProClin 300. Control Negativ: 1 flacon cu picurător cu 1 ml de reactiv negativ de control, alcătuit din latex roşu sensibilizat cu soluţie de albumină bovină. Conservant: <1.5 % ProClin 300 1

2 16 carduri de aglutinare, de unică folosinţă 150 de baghete pentru omogenizare* 2. PASTOREX STAPH-PLUS, trusă de 5 x 50 teste, cod 56353, conţine : Latex test: 5 flacoane cu picurător cu reactiv test (1 ml). Control Negativ: 5 flacoane cu picurător cu reactiv negativ de control (1 ml). Carduri de aglutinare, de unică folosinţă, 4 x 16 Baghete pentru omogenizare, 3 x DEPOZITAREA Odată desigilaţi, toţi reactivii sunt stabili până la datele de expirare indicate pe etichete, cu condiţia păstrării la +2-8 C şi în absenţa contaminării microbiene. Păstraţi flacoanele cu reactivi latex în poziţie verticală. REACTIVII LATEX UN SE CONGELEAZĂ. 6- MATERIAL NECESAR, DE PROCURAT Ansă pentru recoltarea coloniilor bacteriene Container de dezinfecţie sau autoclavabil pentru eliminarea materialelor folosite. 7- MĂSURI DE PRECAUŢIE Trusa Pastorex Staph-Plus este destinată exclusiv confirmării culturilor pure proaspete şi NU trebuie utilizată direct pe prelevatele clinice. Calitatea rezultatelor depinde de respectarea cu stricteţe a Bunelor Practici de Laborator. Toţi reactivii şi probele trebuie folosite la temperatura camerei, între 18 şi 25 C. Nu atingeţi suprafaţa de reacţie a cardurilor de aglutinare. Schimbaţi pipeta sau vârful de unică folosinţă pentru fiecare probă testată. Agitaţi flacoanele cu latex înainte de folosire. Ştergeţi vârful picurătorului pentru a obţine picături calibrate corect. Ţineţi flaconul de reactivi vertical pentru a pipeta picăturile. Utilizaţi baghetele de plastic furnizate pentru omogenizarea reactivului latex cu coloniile bacteriene. NU folosiţi baghete de lemn. Schimbaţi bagheta pentru omogenizare la fiecare reacţie. Aruncaţi toate materialele folosite într-un recipient autoclavabil sau într-un container de dezinfecţie. MĂSURI DE IGIENĂ ŞI PROTECŢIA MUNCII Observaţi întotdeauna tehnicile curente şi precauţiile de protecţie faţă de riscurile microbiologice. Atentie: Acesti reactivi contin ProClin 300 <1.5 %. Pentru recomandări privind pericolele şi măsurile de precauţie asociate unor componente chimice din acest kit de test, vă rugăm să consultaţi pictograma (pictogramele) menţionată(e) pe etichete şi informaţiile furnizate la sfârşitul instrucţiunilor de utilizare. Fişa tehnică de siguranţă este disponibilă la 8- PROTOCOLUL DE LUCRU 1. PREGĂTIREA PROBELOR Probele de testat cu această trusă trebuie să fie pure şi proaspete. Mediile de izolare recomandate (sau echivalente) sunt următoarele: Medii geloză Agar tripto-cazeină-soia Agar Columbia + sânge de oaie Agar Columbia Geloză-sânge Mediu Chapman (agar sare manitol) Mediu Baird-Parker cu suplimente MRSASelect Efectuaţi o coloraţie Gram şi testul catalazei pentru bacteriile cultivate. Coloniile de testat cu reactivul PASTOREX STAPH-PLUS trebuie să fie coci Gram pozitivi catalazo-pozitivi. 2

3 2. REACŢIA DE AGLUTINARE Omogenizaţi temeinic reactivii latex prin agitare. La nevoie, vortexaţi. Depuneţi 1 picătură de reactiv latex test într-unul din cerculeţele cardului de aglutinare. Depuneţi 1 picătură de reactiv latex negativ de control într-un cerculeţ separat. Prelevaţi 1 la 3 colonii de coci Gram pozitivi catalazo-pozitivi cu ansa de cultură sau o baghetă de plastic, apoi emulsionaţi coloniile cu 1 picătură de latex timp de 10 secunde. Repetaţi etapa 4 pentru reactivul latex negativ de control. Omogenizaţi printr-o mişcare de rotaţie uşoară a cardului. Rezultatele trebuie citite în 30 de secunde, cronometrate din momentul începerii rotirii cardului. Efectuaţi citirea, apoi aruncaţi cardul în containerul de infecte. NU refolosiţi cardul. 9- INTERPRETAREA REZULTATELOR Reacţia pozitivă O reacţie pozitivă se identifică prin formarea agregatelor în mai puţin de 30 de secunde, numai cu reactivul latex test, vizibile cu ochiul liber şi iluminare normală. Agregatele de particule latex pot avea consistenţe (talii) diferite, pe fond roz mai mult sau mai lăptos. Apariţia unei aglutinări lente şi slabe ca intensitate poate semnifica o reacţie nespecifică. Reacţia negativă În cazul unei reacţii negative, suspensia nu va prezenta agregate, păstrându-şi aspectul lăptos. Rezultatele neinterpretabile Un rezultat neinterpretabil corespunde aglutinării reactivului negativ de control. În această situaţie, cercetaţi prezenţa coagulazei libere şi a DNazei termostabile. 10- CONTROLUL DE CALITATE AL TESTULUI Evaluaţi reactivul latex la fiecare utilizare, prin verificarea la depunerea latexului pe card a absenţei oricărei aglutinări. Latexul trebuie să fie testat periodic cu tulpini deja identificate de Staphylococcus aureus şi Staphylococcus epidermidis. Reactivul latex trebuie să aglutineze cu Staphylococcus aureus şi să nu aglutineze cu Staphylococcus epidermidis. Latexul negativ de control nu trebuie să aglutineze cu niciunul din germenii menţionaţi. 11- CONTROLUL DE CALITATE LA PRODUCĂTOR Toţi reactivii produşi şi comercializaţi de firma Bio-Rad sunt supuşi unui sistem de asigurare a calităţii, începând de la recepţia materiilor prime şi până la comercializarea produsului finit. Calitatea fiecărui lot este atent controlată, iar acesta este eliberat pe piaţă numai atunci când îndeplineşte criteriile de admitere. Documentele referitoare la producţia şi controlul fiecărui lot sunt păstrate la Bio-Rad. 12- PERFORMANŢE Performanţele PASTOREX STAPH-PLUS au fost evaluate în mai multe laboratoare diferite (2, 13, 14). S-au testat cu această trusă în total 440 de tulpini de S. aureus şi 138 de alte tulpini de stafilococ. Culturile au fost identificate prin coloraţie Gram, activitatea catalazei şi ai coagulazei. Probele discordante au fost apoi verificate prin analiză biochimică şi un test rapid comercial. Suşele de S. aureus au mai fost testate şi pentru sensibilitatea la meticilină. Rezultatele testelor de sensibilitate ale tulpinilor de S. aureus meticilino-rezistente (MRSA), a celor meticilino-sensibile (MSSA), precum şi totalul rezultatelor pentru Staphylococcus aureus, sunt prezentate în Tabelul 1. Rezultatele studiilor de specificitate pe alte suşe de stafilococi sunt prezentate în Tabelul 2. Tabel 1 Performanţele testării izolatelor de MRSA şi MSSA cu Pastorex STAPH-PLUS Total Pozitive Negative Sensibilitate relativă SARM 217* % SASM % Total S. aureus 439* % * un rezultat neinterpretabil a fost exclus S. aureus meticilino-rezistent Aşa cum se observă din Tabelul 1, 217 de izolate bine caracterizate de MRSA au fost corect identificate din totalul de 217 testate cu PASTOREX STAPH-PLUS. Sensibilitatea testului PASTOREX STAPH-PLUS pentru tulpinile MRSA a fost estimată la 100%, din care s-a eliminat rezultatul neinterpretabil ce reprezintă 0,4% din suşele analizate. 3

4 S. aureus meticilino-sensibil Toate cele 222 de tulpini de MSSA cultivate au produs rezultate pozitive cu testul PASTOREX STAPH-PLUS, aşa cum se observă în Tabelul 1. Sensibilitatea obţinută la această populaţie bacteriană de MSSA a fost de 100%. Alţi stafilococi Tabel 2 Performanţele Pastorex STAPH-PLUS la testarea altor suşe de stafilococ Alte tulpini de stafilococ Total Pozitive Negative Specificitatea relativă ,3 % Un număr de 138 de izolate de stafilococ, altele decât S. aureus, incluzând S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis, S. saprophyticus, S. schleiferi, S. lugdunensis şi alte specii, au fost de asemenea analizate cu PASTOREX STAPH- PLUS. Aşa cum se poate vedea în Tabelul 2, 137 din 138 de izolate au fost negative. Tulpina discordantă a fost identificată ca fiind S. lugdunensis, iar la analiza cu un test rapid alternativ, a produs tot un rezultat pozitiv. 13- LIMITELE METODEI Staphylococcus lugdunensis şi Staphylococcus schleiferi sunt cunoscute ca posesoare de factor de afinitate pentru fibrinogen (7,9) şi, prin urmare, pot reacţiona pozitiv cu testul de detecţie a cestui factor, în funcţie de tulpini şi de mediul de izolare. Deoarece unele suşe de stafilococ, cu precădere Staphylococcus saprophyticus, sunt recunoscute pentru capacitatea de a provoca aglutinarea nespecifică a particulelor latex, se recomandă folosirea latexului de control furnizat în trusă cu fiecare suşă testată. Staphylococcus intermedius şi Staphylococcus hyicus, identificaţi în patologia animală dar rareori izolaţi la om, pot da reacţii pozitive în testele clasice pentru coagulază şi, prin urmare, reacţiona - cel puţin în teorie - şi cu testele de detecţie a factorului de afinitate pentru fibrinogen. Ca în cazul oricărei alte tehnici imunologice, posibilitatea unor reacţii încrucişate nu trebuie exclusă. Unii streptococi posedă o proteină cu afinitate pentru fragmentele Fc ale imunoglobulinelor şi, din acest motiv, putând reacţiona cu latexul. Reacţii nespecifice generate de tehnicile bazate pe latex au mai fost raportate la mai multe specii, inclusiv la Escherichia coli şi Candida albicans (17). Se recomandă efectuarea unei coloraţii Gram şi testarea catalazei la coloniile de testat, înaintea testului cu latex. Reacţiile fals negative se pot observa dacă tulpina de Staphylococcus aureus izolată nu produce factorul de afinitate pentru fibrinogen (clumping factor), proteină A, sau polizaharide capsulare, pentru care au fost preparaţi anticorpii monoclonali specifici furnizaţi în trusă. Rezultate fals negative mai pot apărea dacă inoculul este insuficient. 14- BIBLIOGRAFIE 1. Boutonnier A., Nato F., Bouvet A., Lebrun L., Audurier A., Mazie J.C., and Fournier J.M. Direct testing of blood cultures for detection of the serotype 5 and 8 capsular polysaccharides of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol : Davies S. Detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus: the evaluation of rapid agglutination methods, Br. J. Biomed. Sci., 1997, 54: Esserts I., and Radebold K. Rapid and reliable identification of Staphylococcus aureus by a latex agglutination test. J. Clin. Microbiol Fournier J.M., Boutonnier A., and Bouvet A. Staphylococcus aureus strains which are not identified by rapid agglutination methods are of capsular serotype 5. J. Clin. Microbiol : Fournier J.M., Bouvet A., Boutonnier A., Audurier A., Goldstein F., Pierre J., Bure A., Lebrun L., and Hochkeppel H.K. Predominance of capsular polysaccharide type 5 among oxacillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol : Fournier J.M., Hannon K., Moreau M., Karakawa W.W., and Vann W.F. Isolation of type 5 capsular polysaccharide from Staphylococcus aureus. Ann. Inst. Pasteur/Microbiol : Freney J., Brun Y., Bes M., Meugnier H., Grimont F., Grimont P.A.D., Nervi C., and Fleurette J. Staphylococcus lugdunensis sp. No. and Staphylococcus schleifer sp. Nov., two species form human clinical specimen. J. Clin. Microbiol : Hochkeppel H.K., Braun D.G., Vischer W., Imm A., Sutter S., Staeubli U., Guggenheim R., Kaplan E.L., Boutonnier A., and Fournier J.M. Serotyping and electron microscopy studies of Staphylococcus aureus clinical isolates with monoclonal antibodies to capsular polysaccharide types 5 and 8. J. Clin. Microbiol : Jean Pierre H., Darbas H., Jean-Roussenq A., and Boyer G. Pathogenicity in T cases of Staphylococcus schleiferi, a recently described species. 10. Karakawa W.W., Fournier J.M., Vann W.F., Arbeit R., Schneerson, R.S. and Robbins. J.B. Method for the serological typing of the capsular polysaccharides of Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 1985, 22: Kloos W.E. and Lambe D.W. (1991). Staphylococcus Manual of Clinical Microbiology, 5th Ed. Edited by Balows A., Hausler W.J., Herrmann K.L., Isenberg H.D., and Shadomy J.J. American Society for Microbiology, Washington, D.C., Pages

12. Kloos W.E., and Scleifer K.H. Staphylococcus Bergeyís manual of systematic bacteriology. 1986, vol. 2, 1013-1035. 13. Luijendijk AD., Alex van Belkum, Verbrugh H., and Kluytmans J.

odinger W. Dierich M.P., Evaluation of commercially available agglutination tests for methicillinresistant. 8 th ECCMID Congress, Lausanne, 1997. 15. Ruane P.J., Morgan M.A., Citron D.M., and Mulligan M.

5 12. Kloos W.E., and Scleifer K.H. Staphylococcus Bergeyís manual of systematic bacteriology. 1986, vol. 2, Luijendijk AD., Alex van Belkum, Verbrugh H., and Kluytmans J. Comparison of Five Tests for Identification of Staphylococcus aureus from Clinical Samples. J. Clin. Microbiol., 1996, 34: Neher C., Allerberger F., Prodinger W. Dierich M.P., Evaluation of commercially available agglutination tests for methicillinresistant. 8 th ECCMID Congress, Lausanne, Ruane P.J., Morgan M.A., Citron D.M., and Mulligan M.E. Failure of rapid agglutination methods to detect oxacillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol : Selepack S.T., and Witebsky F.G. Inoculum size and lot-to-lot variation as significant variables in the tube coagulase test for Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 1985, 22: Kronvall G. A Surface Component in Group A, C, and G Streptococci with Non-Immune Reactivity for Immunoglobulin G. J. Immunology., 1973, vol.11,

6 6

7 Distributed in the USA by Bio-Rad Laboratories Diagnostics Group th Avenue N.E. Redmond, WA For Customer Orders Call : BIORAD For Technical Service Call : BIORAD ( ) Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) /01 Fax : +33 (0)

VISUAL FOX PRO VIDEOFORMATE ŞI RAPOARTE. Se deschide proiectul Documents->Forms->Form Wizard->One-to-many Form Wizard

VISUAL FOX PRO VIDEOFORMATE ŞI RAPOARTE Fie tabele: create table emitenti(; simbol char(10),; denumire char(32) not null,; cf char(8) not null,; data_l date,; activ logical,; piata char(12),; cap_soc number(10),;